水中總大腸菌群的檢測(cè)及分離鑒定
一、概述 試驗(yàn)方法及結(jié)果 多管發(fā)酵法 濾膜法 樣品名稱 接種量(m1) 初發(fā)酵試驗(yàn)陽(yáng)性管數(shù) 總大腸菌群(個(gè)/L) 過(guò)濾量(ml) 大腸菌群(個(gè)) 總大腸菌群(個(gè)/L) 香洲水廠出廠水 300 0 <3 333 0 <3 市府飯?zhí)霉芫W(wǎng)水 300 0 <3 333 0 <3 拱北市場(chǎng)管網(wǎng)水 300 0 <3 333 0 <3 西江河水 55.5 5(10ml) 2(1.0ml) 490 100 42 420 桂山島山水 55.5 2(10ml) 50 333 13 39
總大腸菌群是指一群需氧及兼性厭氧的，在37℃生長(zhǎng)時(shí)能使乳糖發(fā)酵，在24h內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。該菌與醫(yī)學(xué)細(xì)菌學(xué)分類中的大腸桿菌不同。它包括腸桿科的四個(gè)菌屬：艾希氏菌屬、檸檬酸桿菌、克雪伯氏桿菌以及副腸桿菌屬[1、2]。在飲用水的微生物安全監(jiān)測(cè)中，大腸菌群是水的糞便污染指標(biāo)菌，以該菌的檢出情況來(lái)表示水中有否糞便污染及其程度。因?yàn)榧S便中可能會(huì)帶有一些腸道致病菌，所以水中總大腸菌群數(shù)的高低，也反映了其對(duì)人體健康危害性的大小。
本文對(duì)香洲水廠出廠水、市府飯?zhí)霉芫W(wǎng)水、西江河水和桂山島山水進(jìn)行了總大腸菌群的檢驗(yàn)。檢驗(yàn)方法采用多管發(fā)酵法和濾膜法[1]。兩種方法測(cè)定結(jié)果基本一致。并對(duì)檢驗(yàn)中培養(yǎng)所產(chǎn)生的菌落進(jìn)行了分離鑒定，分離得到3株艾希氏大腸桿菌、2株檸檬酸桿菌和3株產(chǎn)氣克雷伯氏桿菌。
二、檢測(cè)
1.儀器
顯微鏡、放大鏡、革蘭氏染色用有關(guān)器材、試管、平皿、刻度吸管、濾膜、無(wú)齒鑷子、抽濾設(shè)備、水浴鍋、恒溫箱、水箱及消毒、滅菌用有關(guān)器材。
2.培養(yǎng)基
2.1多管發(fā)酵法：
2.1.1初發(fā)酵試驗(yàn)：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液及其三倍濃縮液；
2.1.2平板分離：品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基；
2.1.3復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液。
2.2濾膜法：
2.2.1初培養(yǎng)：品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基；
2.2.2復(fù)檢試驗(yàn)：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液。
3.培養(yǎng)條件
3.1培養(yǎng)溫度：37℃
3.2需氧條件：常壓空氣下培養(yǎng)
3.3培養(yǎng)時(shí)間：1～2天
4.結(jié)果
培養(yǎng)特性：在乳糖蛋白胨培養(yǎng)液上培養(yǎng)一天后，西江河水、桂山島山水的初發(fā)酵管中，部分變黃變濁，并伴有氣泡，或出現(xiàn)絮狀沉淀，均帶有糞臭味。將產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸的發(fā)酵管分別接種于品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基培養(yǎng)一天后，平板上出現(xiàn)多種菌落，其中有三種典型菌落：紫紅色，帶金屬光澤，圓形，邊緣整齊，凸，潤(rùn)，1～3mm大小；深紅色，圓形，邊緣整齊，凸，潤(rùn)，1～3mm大；淺紅色，中心色稍深，稍園或不規(guī)則，扁平，發(fā)粘，2～4mm大小。西江河水、桂山島山水的濾膜在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上經(jīng)初培養(yǎng)后，也出現(xiàn)了上述菌落。
形態(tài)特征：三種典型菌落的生長(zhǎng)菌呈革蘭氏陰性，無(wú)芽孢，菌體大小約0.5～l×1～3μm，桿狀，兩端鈍圓。其中前面兩種菌落的生長(zhǎng)菌能運(yùn)動(dòng)，不形成莢膜；而菌落發(fā)粘的生長(zhǎng)菌不運(yùn)動(dòng)，部分可形成莢膜。
鏡檢后將符合大腸菌群性狀的菌落接種于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，培養(yǎng)一天后，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象，證實(shí)有大腸菌群存在。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。
三、分離鑒定
對(duì)河水和山水在檢測(cè)中培養(yǎng)產(chǎn)生的三種典型大腸菌菌落進(jìn)行純分離培養(yǎng)檢查。
1.鑒定培養(yǎng)基
MFC培養(yǎng)基，煌綠肉湯培養(yǎng)基，西蒙氏檸檬酸鈉瓊脂，氰化鉀肉湯培養(yǎng)基，葡萄糖酸鈉肉湯培養(yǎng)基。
2.培養(yǎng)條件
2.1 培養(yǎng)溫度：33℃ 37℃ 44℃
2.2 需氧條件：常壓空氣下培養(yǎng)
2.3 培養(yǎng)時(shí)間：1～2天
3.分離鑒定方法
將平板分離得到的三種菌落再分別接種于品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基進(jìn)行純培養(yǎng)后．挑紫紅色帶金屬光澤的菌落，移植MFC培養(yǎng)基和煌綠肉湯培養(yǎng)檢查；挑深紅色或紅色無(wú)光澤的菌落移植檸檬酸鈉瓊脂和氰化鉀肉湯培養(yǎng)檢查；挑淺紅色(粘、大)的菌落移植葡萄糖酸鈉肉湯培養(yǎng)檢查：
4.結(jié)果
從兩份不同樣品中，分離鑒定出3種共8株腸桿菌．其種類分布及來(lái)源見(jiàn)表2。從表2可見(jiàn)．由西江河水分離的腸桿菌有：艾希氏大腸桿菌、檸檬酸桿菌和產(chǎn)氣克雷伯氏桿菌。由桂山島山水分離的腸桿菌有：檸檬酸桿菌和產(chǎn)氣克雷伯氏桿菌。其形態(tài)特征如1．4中所述。
培養(yǎng)特性：
在MFC培養(yǎng)基上培養(yǎng)一天后，艾希氏大腸桿菌菌落l～3mm大。畧A形．邊緣整齊．凸．潤(rùn)．藍(lán)色，中心色稍深；在煌綠肉湯中培養(yǎng)一天后，產(chǎn)氣。
檸檬酸桿菌在氰化鉀肉湯中培養(yǎng)兩天后，產(chǎn)氣．醋酸鉛濾紙條顏色變黑：在檸檬酸鈉瓊脂上培養(yǎng)2天后．出現(xiàn)圓潤(rùn)小的菌落。
產(chǎn)氣克雷伯氏桿菌在葡萄糖酸鈉肉湯中培育兩天后．加入Benedict試劑．置于沸水浴中10分鐘后，出現(xiàn)褐色沉淀。
生化試驗(yàn)：
對(duì)所分離的腸桿菌進(jìn)行生化試驗(yàn)：靛基質(zhì)生成試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、V.P.試驗(yàn)、硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)等。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。
檢測(cè)結(jié)果(表1)
分離腸桿菌代表株生化試驗(yàn)表(表2)
|
內(nèi)容 樣品名稱 |
菌種名稱 |
分離株數(shù) |
代表菌株 |
|
靛基質(zhì) |
甲基紅 |
V.P. |
硫化氫 |
明膠液化 |
|
西江河水 |
艾希氏大腸桿菌 |
3 |
E1-1 |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
- |
|
檸檬酸桿菌 |
1 |
C1-1 |
- |
- |
+ |
- |
+ |
- |
|
|
產(chǎn)氣克雷伯氏桿菌 |
1 |
K1-1 |
- |
- |
- |
+ |
- |
- |
|
|
桂山島山水 |
檸檬酸桿菌 |
1 |
C2-1 |
- |
- |
+ |
- |
+ |
- |
|
產(chǎn)氣克雷伯氏桿菌 |
2 |
K2-2 |
= |
- |
- |
+ |
- |
- |
|
|
艾希氏大腸桿菌(對(duì)照菌株．引自上海生化所) |
+ |
+ |
+ |
- |
= |
= |
|||
四、討論
采用多管發(fā)酵法和濾膜法檢測(cè)飲用水、水源水的總大腸菌群．兩種方法結(jié)果基本一致，前者的數(shù)值相對(duì)較大，可能是因?yàn)槎喙馨l(fā)酵法采用的MPN法存在正的統(tǒng)計(jì)誤差。濾膜法可以除去水樣中最影響細(xì)菌生長(zhǎng)的成分，對(duì)較潔凈的水又可以增加其濾過(guò)量．有利于提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度和精密度，檢測(cè)出廠水、管網(wǎng)水等潔凈度高的水特別適用。對(duì)于濁度較大的水源水．采用多管發(fā)酵法較為合適。
西江河水的總大腸菌群數(shù)量較多，經(jīng)分離鑒定含有艾希氏大腸桿菌、檸檬酸桿菌和產(chǎn)氣克雷伯氏桿菌，這可能是河水前期和近期曾受到動(dòng)物糞便污染。桂山島山水含有少量的大腸桿菌，經(jīng)分離鑒定含有：檸檬桿菌和產(chǎn)氣克雷伯氏桿菌，這可能是山水前期曾受到動(dòng)物糞便污染。因此，河水和山水均可能帶有其其他的腸道致病菌，而大腸桿菌在一些情況下也會(huì)導(dǎo)致毒血病和某些炎癥，可見(jiàn)河水和山水均不宜直接作為飲用水使用。
水源水中細(xì)菌種類繁多，大腸菌群作為糞便污染指標(biāo)菌而提出來(lái)．艾希氏大腸桿菌因存在于溫血?jiǎng)游锬c道內(nèi)，而被稱為糞性大腸菌，糞性大腸菌在水源水的監(jiān)測(cè)中已日趨重要：上述三種腸桿菌是大腸群中的常見(jiàn)菌，對(duì)其分離鑒定的目的是為了熟悉水中大腸菌群的形態(tài)特征、培養(yǎng)特性及其生化反應(yīng)
使用微信“掃一掃”功能添加“谷騰環(huán)保網(wǎng)”
